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本试验旨在研究日粮中添加100mg/kg“超抗威”对蛋鸡采食量、产蛋率、蛋重、破蛋率、畸形蛋率和蛋品质的影响；测定蛋鸡血液指标、肠道组织结构和盲肠微生物组成，探讨蛋鸡饲料中添加“超抗威”对蛋鸡生产性能、肠道健康和免疫功能的影响。

1 材料与方法

1.1 试验材料和分组

试验材料为“超抗威”（由松刚（福建）生物工程有限公司提供），试验动物为192只48周龄（2021.3.16号）海兰褐蛋鸡（体重相近、外形整齐、健康活泼），产蛋率为93%左右，分别饲喂基础日粮（对照组，表1）和试验日粮（对照组+100mg/kg“超抗威”）。每组6个重复，每个重复16只鸡。

表1. 基础饲粮组成及营养水平

1.2 饲养管理

采用2层A式笼养鸡，六个处理均匀地分布在各层，每笼2只。每日喂料2次，每天8∶00和14∶00各喂料一次，喂料时根据上次喂料后鸡的采食情况，适当增减给料量，使鸡保持自由采食状态。每天14:30捡蛋。自由饮水，每日6:00-10:00光照16 h。每天清粪打扫卫生1次。每天记录产蛋数、破蛋数（包括软蛋）、合格蛋重、畸形蛋数。

1.3 试验方法

1.3.1 鸡蛋品质指标

于正式试验第27天根据捡蛋时间，每组各取30枚鸡蛋（每个重复取中间笼位置5枚鸡蛋，捡蛋的时候用记号笔标记好），共60枚鸡蛋。

1.3.2 血液和指标

正式试验前1天下午18：00清理料槽，禁食。

正式试验第1天开灯后添加各组对应的饲料，记录第一天的产蛋数等生产性能指标。正式试验开始后，要确保料槽中随时都有饲料，保证蛋鸡能够自由采食。

正式试验第28早上7点清理料槽，记录余料重。

从各重复组中间笼位取 2只鸡，共24只，放入蛋鸡采样笼中，其余鸡正常饲喂试验料。采样鸡用饮水器提供饮水，禁食8小时后，翅静脉采血 3 ml，3000 r／min 离心10 分钟，取血清，-20 ℃低温保存待测（血常规、血清细胞因子）。采血后屠宰取肝脏组织样测定酶活；取十二指肠、空肠和回肠固定样测定肠道绒毛长度和隐窝深度；取十二指肠、空肠和回肠分子样测定肠道sIgA含量和肠道屏障分子表达；取盲肠内容物测定微生物组成。

试验第29天，对照组和试验组各取12只测定全血指标。

1.3.3 空肠组织形态

试验蛋鸡屠宰后取空肠中段相同位置1.5 cm左右，放在生理盐水中轻微反复冲洗掉食糜，置于4%多聚甲醛固定液中固定备用，经过常规乙醇脱水、二甲苯透明、石蜡包被等制作组织切片，苏木精-伊红（hematoxylin-eosin staining，HE）染色后，显微镜下观察肠道黏膜形态结构，每张切片选取3个典型视野测量肠道绒毛高度以及隐窝深度。

1.3.4 基因表达测定

测定空肠粘膜Toll样受体4（TLR-4）、闭合小环蛋白ZO-1、闭合蛋白Claudin、咬合蛋白Occludin基因的表达量。

总RNA提取：使用RNA-easy Isolation Reagent提取支气管、心脏、胸肌、肝脏和空肠组织RNA。提取的RNA置于-80℃保存，备用。

RNA反转录：使用艾科瑞生物Evo M-MLV反转录试剂预混液。反转录采用20μL体系，反转录程序为37℃15min，85℃5s，4℃保存。体系反转录得到的cDNA置于-80℃保存，备用。

引物设计：本试验根据GeneBank 上提交的序列设计引物，由上海生工生物技术有限公司合成。

荧光定量PCR：使用艾科瑞生物SYBR Green Pro Taq HS预混型qPCR试剂盒，在ABI 7500 荧光定量PCR 仪上进行。反应程序为：95℃预变性30s，95℃5s与60℃30s反应循环40次，每个样品基因的相对表达水平根据Ct值标准化，并使用2^-△△Ct方法定量。

1.3.5 抗氧化及肠道免疫指标测定

试验组织样品使用PBS溶液制备10%的组织匀浆液，使用上海酶联生物ELISA试剂盒，应用双抗体夹心法测定肠道SIgA及肝脏SOD1活力。

1.3.6 血清细胞因子检测

血清细胞因子检测使用上海酶联生物ELISA试剂盒，应用双抗体夹心法测定血清白细胞介素-2（IL-2）、转化生长因子-β（TGF-β）、肿瘤坏死因子（TNF）、内毒素（LPS）、8羟基脱氧鸟嘌呤（8-oxo-dG）。

1.3.7 盲肠微生物菌群测定

使用16s rDNA方法测定盲肠微生物。

2 数据统计分析

使用SAS软件统计分析个处理组之间生产性能、蛋品质等差异显著性。

3 结论

与对照组相比，日粮中添加100mg/kg的“超抗威”：

（1）显著降低蛋鸡鸡蛋不合格率，提高产蛋率。

（2）改善蛋的品质,对降低料蛋比有一定的促进作用。

（3）显著提高鸡蛋蛋壳黄度，极显著提高蛋壳硬度与蛋黄颜色。

（4）改善肝脏抗氧化的能力，有助于提高十二指肠和回肠SIgA量，改善肠道免疫。

（5）一定程度上增加十二指肠、空肠以及回肠的绒毛高度，提高绒毛长度与隐窝深度的比值，改善肠道健康。

（6）对血液生化指标、细胞因子及肠道屏障分子表达影响不大，但有增加血液中免疫细胞的趋势。

（7）可以显著提高盲肠中拟杆菌属的丰度，降低盲肠内容物中羧菌丰度，有强化盲肠微生物菌群特定功能的趋势，提高肠道菌群健康度。