“超抗威”对肉鸡生产性能和免疫指标及肠道健康的影响研究-行业动态-松刚(福建)生物工程有限公司-创新科技，驱动生物未来

本试验旨在研究日粮中添加100mg/kg“超抗威”对肉鸡采食量、死淘率、日增重及料重比的影响；测定肉鸡血液指标、肠道组织结构和盲肠微生物组成，探讨肉鸡饲料中添加“超抗威”对肉鸡生产性能、经济效益、肠道健康和免疫功能的影响。

1 材料与方法

1.1 试验设计

试验选取体况一致和体重接近的1日龄AA肉仔鸡144只，随机分为2个处理组（表1）。每组6个重复，每个重复12只鸡。基础日粮参考中华人民共和国国家标准《产蛋鸡和肉鸡配合饲料》（GB/T 5916-2020）进行配制（表2）。试验期为35天，笼养，自由采食和饮水，按正常免疫程序进行免疫接种。试验过程为保证试验效果严禁使用抗生素类药物，其他管理措施与常规饲养管理相同。

1.2 采样安排

在21、35日龄采样，禁食8小时。每次采样从每个重复中选取体重与平均体重相近的两只鸡，翅下静脉采血3 ml，置于促凝管中，分离血清并保存。另取全血3mL，置于抗凝管中待测。取空肠粘膜组织样与空肠切片样。

表1. 试验分组与处理

1.3 生产性能统计

统计21日龄和35日龄生产性能，对每个重复中的鸡称重，并统计采食量和死淘率，计算平均日增重（ADG）、平均日采食量（ADFI）、料重比（F/G）。

表2. 肉鸡饲料两段配方表

1.4 粪便含水量测定

在第21日龄和35日龄收集肉鸡新鲜粪便，粪便应采取多点采样然后混合至均匀。收集的粪便样品称重约10g（粪便重m1），在105℃烘干4小时，在干燥器中放置常温后称量，直至粪便重量到达恒重（干粪重m2）。粪便含水量=粪便重m1—干粪重m2/粪便重m1*100%

1.5 肠道评分与空肠组织形态学分析

对肠道发育进行评分：将消化道取出后，对十二指肠、空肠、回肠分别进行长度测量（Length）和重量统计(Weight)，对长度和重量比例以及肠道器官指数（肠道重量/鸡只重量）进行统计。

空肠段在4%多聚甲醛溶液中固定24h，脱水后石蜡包埋。用莱卡RM2235切片机（Leica RM2235）切取4μm厚的组织切片，固定在玻片上，苏木精-伊红染色。病理切片在配备数码摄像机的徕卡DMI 6000B光学显微镜上（Olympus DP79, Japan）进行检查。使用Image J分析软件（Version 1.47, Bethesda, MD, USA）分析图像。每段随机抽取10个完整绒毛进行形态学测量。从绒毛顶端到绒毛-隐窝交界处测量绒毛高度（VH）。隐窝深度（CD）定义为相邻绒毛之间凹陷的深度。计算绒毛高度与隐窝深度比（V/C）。统计分析中使用了这10个数值的平均值。

1.6 血液常规与血清生化指标测定

使用全自动血细胞分析仪（Prokan Pe-6800）检测全血中白细胞总数、淋巴细胞百分比、中间细胞比率、淋巴细胞数量、中间细胞数量、粒细胞数量、红细胞总数等。

用全自动生化分析系统测定血清中葡萄糖（GLU）、尿酸（UA）、甘油三酯（TG）含量。

1.7 肠道粘膜免疫因子检测

用酶联免疫吸附（ELISA）试剂盒（mlbio Co., Shanghai, China）检测空肠粘膜中分泌型免疫球蛋白A（SIgA）的含量。所有的测定程序都严格按照制造商的说明进行。批内和批间CV均小于10%。

1.8 盲肠微生物组成测定

在第35日龄采样时，收集盲肠内容物。冰上分离盲肠，用细线结扎盲肠开口，置于预冷的无菌离心管内。在超净工作台中，用无菌剪刀剪开盲肠开口，然后将盲肠倒置在无菌玻璃棒上。将大约1g盲肠内容物收集到装有9mL无菌PBS的离心管中，加入灭菌后的钢珠匀浆3min，随后700g离心1min，收集上清，转入新的无菌离心管中，13000g离心5分钟，用无菌PBS漂洗沉淀2次，-20保存备用。将细菌沉淀重悬在50mM的EDTA中，用浓度为10mg/ml的溶菌酶（Sigma, LA, USA）37℃处理45min。随后使用细菌基因组DNA提取试剂盒分离细菌基因组DNA。DNA浓度用分光光度法测定。对细菌16S rDNA引物设计及PCR扩增：根据文献中报道的序列设计Lactobacillus, Clostridium, E. coli 和 Bifidobacteria的引物。为了评估每个被检菌的相对比例，所有的产物都以通用引物产物的含量表示，并计算每个菌群的比例。扩增产物经2%琼脂糖凝胶电泳分离，采用Quantity One 1-D analysis software对凝胶图像进行定量分析。